### 林可霉素检测试剂盒使用说明书（酶联免疫法）

尊龙凯时推出的林可霉素检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法，主要用于检测尿液、组织及蜂蜜等样本中的林可霉素（Lincomycin，Lin）。本试剂盒包括预包被偶联抗原的酶标板、辣根过氧化物酶标记物、抗体、标准品及其他相关配套试剂。在检测过程中，样本中的林可霉素与酶标板上预包被的偶联抗原会竞争抗林可霉素抗体，随后依靠TMB底物的显色反应，样本的吸光度值与其所含林可霉素浓度呈负相关。通过对比标准曲线，可得出样本中的林可霉素残留量。

#### 1. 技术指标

1.1 试剂盒灵敏度：0.05 ppb (ng/ml)
1.2 反应模式：25℃，反应时间30至15分钟
1.3 检测下限：
    尿液、蜂蜜：15 ppb
    组织：3 ppb
1.4 交叉反应率：林可霉素：100%
1.5 样本回收率：
    尿样：90% ± 10%
    组织：80% ± 10%
    蜂蜜：80% ± 15%

#### 2. 试剂盒组成

本试剂盒包含以下组件：
- 酶标板：96孔
- 标准液：各1 ml（0 ppb、0.05 ppb、0.15 ppb、0.45 ppb、1.35 ppb、4.05 ppb、高标准液（红盖）：100 ppb 1 ml）
- 酶标记物（红盖）：55 ml
- 抗体工作液（蓝盖）：55 ml
- 底物液A（白盖）：6 ml
- 底物液B（黑盖）：6 ml
- 终止液（黄盖）：6 ml
- 20×浓缩洗涤液（白盖）：40 ml
- 2×复溶液（黄盖）：50 ml
- 说明书：1份
- 盖板膜：1张
- 自封袋：1个

#### 3. 所需器材与试剂

3.1 仪器：酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（最小分辨率0.001 g）
3.2 微量移液器：单道20 µl-200 µl，100 µl-1000 µl，多道300 µl
3.3 试剂：甲醇、盐酸

#### 4. 样本前处理

4.1 样本处理前须知：确保实验器具洁净，使用一次性吸头以避免污染并干扰实验结果。

4.2 配液：
    提取液：取600 ml去离子水加0.75 ml浓盐酸及100 ml甲醇，混匀。
    复溶液：2×复溶液用去离子水稀释至2倍（1份浓缩复溶液+1份去离子水），在4℃可保存一个月。
    工作洗涤液：将浓缩洗涤液稀释至20倍（1份洗涤液加19份去离子水）。

4.3 样本前处理步骤：
    尿样本处理：取100 µl清亮尿样（浑浊尿样需过滤或离心处理）加入900 µl复溶液，混匀，取50 µl分析。检测下限：15 ppb。
    组织样本处理：称取1 g均质样本，加入5 ml提取液，充分振荡3分钟后离心，取上清液0.2 ml与0.6 ml复溶液混匀，取50 µl分析。检测下限：3 ppb。
    蜂蜜样本处理：称取1 g均质蜂蜜样本，加入5 ml去离子水，振荡后离心，取上清液与复溶液混匀，取50 µl分析。检测下限：15 ppb。

#### 5. 酶联免疫试验步骤

将所需试剂从4℃取出，置于室温平衡30分钟。洗涤液需恢复至室温以确保完全溶解。每种液体试剂使用前摇匀。

5.1 编号：对样本和标准品的微孔编号，每个重复做2孔，记录位置。
5.2 加样反应：向每孔加入50 µl标准品或样本、50 µl酶标记物及50 µl抗体工作液，盖板膜轻轻振荡5秒，25℃反应30分钟。
5.3 洗涤：轻揭膜，甩去孔内液体，加入350 µl工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次用吸水纸拍干。
5.4 显色：每孔加入50 µl底物液A和50 µl底物液B，轻摇混匀，25℃避光显色15分钟。
5.5 终止：每孔加入50 µl终止液，轻摇混匀，终止反应。
5.6 测吸光度：使用酶标仪在450 nm处测量吸光度，建议采用双波长（450/630 nm）进行测定。

#### 6. 结果分析

6.1 百分吸光率的计算：标准液或样本的百分吸光率等于样本的平均吸光度值除以0 ppb标准液的吸光度值，再乘以100%。
6.2 标准曲线的绘制与计算：以标准液百分吸光率为纵坐标，对应的标准液浓度（ppb）的对数为横坐标，绘制半对数曲线，通过标准曲线读出样本浓度，并乘以对应的稀释倍数得出实际浓度。

通过尊龙凯时的专业分析软件进行数据计算，有助于大批量样本的快速与准确分析。

#### 7. 注意事项

7.1 温度低于25℃或试剂未恢复至室温可能导致OD值偏低。
7.2 洗板过程中如出现孔干燥，可能导致标准曲线不线性，操作需迅速。
7.3 混合要均匀，洗涤要彻底，确保分析的一致性。
7.4 孵育期间需使用盖板膜封闭微孔板，避免光线影响。
7.5 禁止使用过期试剂盒，更不可混用不同批号的试剂。
7.6 显色液变质需立即弃用。
7.7 终止液有腐蚀性，避免接触皮肤。

#### 8. 贮藏及保存期

贮藏条件：试剂盒应在2-8℃保存，避免冷冻。保质期为1年，生产日期见包装盒。